期刊简介
本刊为医学综合性学术刊物。以坚持党的四项基本原则，贯彻党和国家的教育、科技、卫生工作方针、繁荣学术研究为宗旨，严格遵守有关法令、法规和条例，面向经济建设，反映我院教学、科研、医疗水平、交流和推广最新科研成果，促进教育卫生事业的发展。主要有基础医学、临床医学、预防医学、综述、临床护理、短篇报导、人文社科研究、教育与管理等。
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首页>赣南医学院学报杂志
- 杂志名称：赣南医学院学报杂志
- 主管单位：赣南医学院
- 主办单位：赣南医学院
- 国际刊号：1001-5779
- 国内刊号：36-1154/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：1997年获江西省先进科技期刊期刊收录：知网收录(中), 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 维普收录(中)
CD4+T淋巴细胞差异表达microRNA在ACS患者的筛选和鉴定
张古老；谢东明；阳贻红；严章林；廖祥中
关键词：急性冠脉综合征, 淋巴细胞, 微小核糖核酸, 基因芯片, 实时定量PCR
摘要：目的:通过检测急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血CD4+ T淋巴细胞基因的miRNA,筛选与健康正常人差异表达的miRNA,鉴定对CD4+ T淋巴细胞具有调控作用miRNA,初步阐明miRNA在ACS发病机制中的作用.方法:选取入住我院的确诊为ACS患者20例为ACS组,以疑似ACS而冠脉造影正常的住院患者20例作为正常对照组;首先抽取新鲜外周静脉20 mL,使用密度梯度离心法分离出循环血中的单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),再使用免疫磁珠法(Magnetic cell sorting system,MACS)进一步分离出CD4+ T淋巴细胞;分离的CD4+ T淋巴细胞一部分用于检测纯度,另一部分用于芯片检测.CD4+T淋巴细胞纯度检测采用流式细胞术法(Flow cytometry,FCM)检测,分离所得的CD4+T淋巴细胞纯度,且采用台酚蓝检测活细胞数.CD4+ T淋巴细胞合格后再行下一步实验,即将另一部分CD4+T淋巴细胞采用Trizol法提取其细胞内总RNA后分两部分,一部分提取的RNA采用聚乙二醇(Poly ethylene glycol,PEG)方法分离纯化miRNA,另一部分用于real time PCR备用.用分光光度计测定RNA的浓度,使用凝胶电泳质检RNA的质量,合格后再使用miRNA基因芯片进行杂交,再用Affymetrix GeneChip Scanner 3000基因芯片扫描仪检测CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA.另一部分RNA采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)对部分差异表达的miRNA进行验证.结果:使用MACS法分离出高纯度的人CD4+ T淋巴细胞.Trizol法能够提取其细胞内较完好的总RNA.miRNA芯片杂交检测及数据分析结果显示,ACS患者与正常对照者CD4+ T淋巴细胞中,在ACS患者中表达显著上调的有:miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155,在ACS患者中表达显著下调的有:miR-126和miR-211.实时定量结果显示,与对照组比较,ACS组miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155的基因表达均显著上调,miR-126和miR-221的基因表达均显著下调(P＜0.05),与Affymetrix miRNA基因表达谱芯片检测结果一致.结论:筛选鉴定的ACS患者外周血CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA,可能参与了ACS的发生发展.
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